免疫荧光染色的相关介绍

   免疫荧光染色是目前常规染色中比较常见的一种方法，免疫荧光染色技术是将荧光素作为抗体标记物进行免疫组织化学染色，带有荧光素的抗体孵育后可以直接使用荧光显微镜观测。该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快；缺点是由于荧光素有一定的淬灭周期，玻片无法长期保存，需要在染色结束后尽快进行镜下观测分析。

免疫荧光染色分为直接法和间接法。直接法是荧光素直接标记在一抗上，孵育后直接观测，快速高效，还可以与多个标记抗体一起做多重荧光染色。间接法是荧光素标记在二抗上，相比直接法染色背景更干净，费用花费也少。

下面介绍一个石蜡切片的免疫荧光单染（间接法）步骤。

1.石蜡切片正常脱蜡至水，PBS洗5分钟，2次；

2.抗原修复，0.01M枸橼酸修复液，沸水浴热修复15分钟；

3.正常山羊血清封闭20分钟，37℃；

4.一抗孵育，4℃过夜；

5.PBS洗5分钟，3次；

6.荧光标记二抗孵育，37℃，90分钟；

7.PBS洗5分钟，3次；

8.DAPI复染，PBS洗5分钟，3次；

9.防淬灭荧光封片剂封片；

10.镜检。