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产品详情

免疫荧光双标

发布日期:2022-4-14 11:39:42来源:http://www.sxyksw.com/product823549.html

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详细介绍

一、免疫荧光双标染色详情介绍:

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应

 

 

二、实验结果图片展示

 

1. 脑组织GFAP/C-FOS双标


2.肿瘤组织CD31/α-SMA双标


二、实验流程

1. 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-

无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精 5min,自来水洗;

2. 抗原修复:组织切片置于盛满柠檬酸(PH6.0)抗原修复液的高压锅内进行抗原修

复,喷气计时 2.5min, 自然冷却后将玻片置于 PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃

动洗涤 3 次,每次 5min;

3. BSA 或者血清封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走),在圈内滴

加用5%BSA,室温封闭 1h;

4. 加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加按一定比例配好的两个种属不同的一抗,切片平放于湿盒内4°C

孵育过夜(湿盒内加少量水防止抗体蒸发);

5. 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次,每次8min。切片稍甩

干后在圈内滴加与一抗种属对应的二抗,两个种属的颜色要区分开,覆盖组织,室温孵育 120min。之后玻片置于 PBS (PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次,每次 8min;

6. DAPI 染核:滴加DAPI,室温孵育10min,之后玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上

晃动洗涤 3 次,每次 6min;

7. 封片:抗荧光淬灭剂封片;

8. 镜检拍照:切片于荧光显微镜下观察并采集图像。(DAPI 紫外激发波长330-380nm,发射波

420nm,发蓝光;FITC激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm,发绿光;CY3激发波长

510-560,发射波长590nm,发红光)。

、染色结果判读:DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色,阳性表达为相应荧光素标记的红光绿光。