组织芯片免疫荧光单标（双色）染色

服务介绍：

组织芯片免疫荧光染色,是将许多不同处理的组织以规则的微阵列方式排列于同一载体上，同时进行相同指标的免疫荧光检测。

实验流程：

1.石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ8min-无水乙醇Ⅰ 6min-无水乙醇Ⅱ 6min-95%酒精  6min-85%酒精 6min-75%酒精  5min-流水冲洗；

2.抗原修复：组织切片置于盛有柠檬酸（PH6.0)抗原修复液的高压锅内进行抗原修复，喷气计时2.5min， 自然冷却后将玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min；

3.灭活：0.3%甲醇过氧化氢灭活15min，PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 6min；

4.BSA 或者血清封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加用 5%BSA，室温封闭 1h；

5.加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内 4°C 孵育过夜（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）；

6.加二抗：玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 8min。切片稍甩干后在圈内滴加与种属对应的荧光二抗，覆盖组织，室温孵育120min。之后玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 8min；

7. DAPI染核：滴加 DAPI，室温孵育10min，之后玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 6min；

8.封片：抗荧光淬灭剂封片；

9.镜检拍照：切片于荧光显微镜下观察并采集图像。（DAPI紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm，发蓝光；FITC激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm，发绿光；CY3激发波长510-560，发射波长590nm，发红光）。

染色结果判读：DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色，阳性表达为相应荧光素标记的红光或者绿光。