冰冻包埋

冰冻包埋需要用到的实验器材有:液氮、锡箔纸、冰冻切片包埋剂OCT、镊子。

冰冻包埋实验步骤:

1、取材当天把所需要包埋的组织放入4%多聚甲醛过夜；

2、将包埋筐放入15%蔗糖溶液过夜(4'C存放)，再将包埋筐放入30%蔗糖溶液过夜(4C存放)；

3、“沉糖”完成后，可进行冰冻包埋；

4、将包埋组织放于托盘中(托盘用锡箔纸包裹)；

5、将托盘放入液氮中，浸没组织，持续3-5s后捞出，如此重复3-4次左右，待脑组织从半透明变为白色即可(组织浸没与液氮的时间不能过长，避免组织碎裂）；

6、组织经液氮速冻后立即用锡箔纸包裹(标注实验编号)，放入-80°C；

7、切片之前30min将组织从-80°C冰箱中取出，放入-20C冰箱中解冻；

8、解冻后用OCT胶包埋组织(包埋时确保需要切片的那一面朝上) 放入冰冻包埋机中，20min左右后即可切片。