油红O染色实验步骤及注意事项

油红O脂肪染色法通常应用于检测组织或细胞内的脂肪情况，油性红O（Oil Red O）是一种脂溶性染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，在脂肪内能高度溶解，其染色原理是油红O能特异性地与组织和细胞内的中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白产生吸附作用从而使脂肪染色。染料在胞内脂质中的溶解度较溶液更大，当燃料加入组织切片时，燃料从有机溶剂转移而溶于组织内的脂质中，使组织内的脂肪呈红色。该染色方法用于分析细胞样品中脂质状况。

实验操作方法：

（1）冰冻切片厚度 6～10µm，不固定或 10%福尔马林固定 10min后水洗

（2）切片加入60%的异丙醇内浸洗 2min

（3）用蒸馏水稍微清洗一遍

（4）切片加入改良油红 O 染色液中，密闭染色 10～15min，该过程注意避光

（5）用蒸馏水清洗一遍

（6）加入 60%的异丙醇内稍洗以去除染液（大约几秒）

（7）加入冰蒸馏水中稍微清洗一遍

（8）Mayer 苏木素染色液复染核 5min

（9）用蒸馏水清洗一遍

（10）片子用滤纸吸干水分

（11）用甘油明胶封片。

注意事项：

1. 石蜡切片不能用于油红O染色，原因在于石蜡包埋过程中需要脱水，脱水过程中需要乙醇-二甲苯和石蜡，二甲苯是有机溶剂，会把中性脂肪溶解；

2. 冰冻切片准备时，包埋的降温过程建议选择干冰，原因在于若选择液氮降温过程较强烈，可能导致组织内部炸裂，而干冰降温的过程比较缓和，染出来的片子比较好看；

3. 切片的厚度要稍微厚一些，建议选择8-10μm；

4. 实验设计建议设计阴性对照和阳性对照，如阳性对照可以用脂质丰富的肝脏组织等，阴性对照可以根据文献来选择无脂肪沉积的组织。

实验结果展示