PAS染色实验方法

PAS糖原染色

PAS染色是病理学中常用的染色方法之一，用于显示糖原和其他多糖。

该方法利用氧化剂将糖类及相关物质中的1,2-乙二醇基氧化为二醛，然后与Schiff试剂结合形成品红化合物，从而产生紫红色的染色效果。除了糖原，PAS技术还可以显示中性黏液性物质、某些酸性物质、软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质和基底膜等。该染色液在病理学领域被广泛应用。

一、PAS糖原染色的操作步骤

1、脱蜡至水：使用不同浓度的二甲苯和乙醇溶液，将蜡块中的蜡去除，最后用蒸馏水洗涤。

2、过碘酸反应：将样本滴加过碘酸溶液，避光反应10分钟后，去除过碘酸溶液，用蒸馏水洗涤。

3、Schiff试剂染色：将样本滴加Schiff试剂，放入湿盒中，在37°C烘箱中避光染色30分钟至1小时。去除染色液，用蒸馏水洗涤。

4、苏木素染色：将样本滴加苏木素染色液，染色30秒后去除，用蒸馏水漂洗多次直到浮色洗去。

5、盐酸乙醇分化液分化：将样本浸泡于盐酸乙醇分化液中30秒，去除分化液后用自来水漂洗。

6、脱水和透明化：使用乙醇和二甲苯进行脱水和透明化处理。

7、中性树胶封片：最后将样本封装在中性树胶中。

染色结果分析：糖原、多糖类物质和其他PAS反应阳性物质呈洋红色，细胞核呈蓝色。

二、注意事项：

1、高典酸溶液为透明溶液，配制后应存放在4℃冰箱备用。由于无法通过颜色来判断高典酸的好坏，建议定期更换高典酸溶液。

2、所有染色试剂都应该在低温条件下保存。在使用前的半小时内将试剂取出恢复至室温。

3、Schiff染液的染色时间可以根据温度进行调整。在室温较高的情况下，可以缩短染色时间；而在冬季或室温较低的情况下，可以延长至大约20分钟左右。