什么原因使冰冻切片出现裂隙?如何预防?

制作冰冻切片过程中，切片常常会出现大小裂隙，特别是含水分多的组织:如甲状腺、肝脏、脑、脾、肾组织以及一些细胞较丰富的如软组织肿瘤、淋巴结组织比较容易出现裂隙。由于大小裂隙可以破坏组织结构的完整性，大大增加了医生们阅片的困难，严重地影响了医生们对冰冻切片作出准确的判断，导致风险增加。

那么，有哪些因素可以造成冰冻切片出现大小裂隙呢?两个重要原因:一是冰晶，由于受检组织缓慢冷冻，细胞水份析出所致，或受检新鲜组织没有避开水源而造成冰晶产生。二是组织块的硬度，一般受检组织经过一定的时间冷冻就会变得坚硬。但是，温度过低及冻过头的组织，或含水分多的组织，随着硬度的增加而脆性增加，容易造成冷冻组织切片时组织破碎的状况。在实际工作中，要做到既不能缓慢冷冻，又不能温度过低而过度冷冻，确实较难以掌握。

那么，既然造成冰冻切片出现大小裂隙的原因找到了，又有什么方法可以去改善或消除在制作冰冻切片过程中常常会出现的大小不等裂隙呢?随着在工作中不断观察、分析和总结，笔者逐步摸索出了一个既简单又容易操作的方法。

方法如下:

1)取材:取材厚度适中，以3~5μm为宜，尽量避开水源。

2)冰冻组织:先在冷冻托头中心滴上OCT或胶水，随后放置组织块，将组织块深入包埋剂中，接着移置到冷冻箱冷冻台上冷冻，冷冻箱温度设置在-23℃至-25℃。

3)热交换装置;将冷冻托头放置在冷冻台后等待，待组织四周开始冷冻逐渐向中间变白时，即可用热交换装置压平组织，使冷冻组织表层瞬间冷却，这样做，既可消除冰晶形成，又可加速冷冻，节约时间。

4)切片:组织制成块后，即移置夹头进行切片，修至所需切面后，连续切片2~3张放弃，再用戴着手套的手的大拇指或大鱼际肌温暖切片3~4秒，然后稍慢而匀速的切取所需切片。根据物理原理，温暖切面3~4秒后，组织表面硬度下降而脆性度也下降。这样做不但能很好的改变或消除冰冻切片出现大小裂隙，而且，组织结构清晰，冰晶导致的空泡也得以改善，要注意的是温暖组织切面时间不能超过5秒，否则组织结构模糊不清。

5)固定;切取所需切片贴片后，迅速固定。可采用的固定液是FineFIX液，因为是湿片固定，比较容易脱片，而FineFIX液固定不易脱片。

6)染色、分化、脱水、封片同常规。