WB实验样本收集方法

一、细胞的采集、处理和保存

    1、细胞板贴壁细胞收集：

   细胞弃培养上清，预冷PBS轻柔洗涤保证完全去除培养基，加少量预冷的PBS用细胞刮刀将细胞收集于冻存管，4℃1500rpm离心去除上清后得到细胞，置于液氮速冻。

    2、细胞团块收集：

细胞团块加1ml 预冷PBS重悬（注意不要过于剧烈造成细胞破裂），4℃ 1000rpm离心5分钟，弃上清，重复3次，4℃1500rpm离心去除上清后得到细胞，置于液氮速冻。

    3、悬浮细胞收集：

将培养完成的细胞，转移至EP管，1000rpm离心5分钟，弃上清，加1ml 预冷PBS重悬，4℃1500rpm离心去除上清，重复一次，得到细胞，置于液氮速冻。

    4、保存与运输：

    ①　收集并液氮速冻的细胞保存于-80℃冰箱，可保存3个月。

    ②　与PCR不同，提取蛋白所用的RIPA裂解液不能保持蛋白的稳定，所以尽量运输完整的细胞（干冰运输）。

二、组织的采集、处理和保存

    1.组织收集：取材应在冰上进行，取材后组织用生理盐水冲洗干净，去除血渍和污物，并剔除非研究所需的组织。取动物的组织，动作要求迅速，尽量避免样本在环境中暴露太久。

     2.组织处理：取材完成后吸干水渍并切小块，放入已标记的冻存管中，液氮速冻后，转运至-80℃冰箱。

     3.保存：新鲜的组织可以在-80℃冰箱保存半年左右，1年内冻存组织均可尝试进行定量WB实验；

     4.运输：干冰运输。