骨组织脱钙正确的操作流程是怎样的及应该注意什么问题

骨组织脱钙标准技术流程:

1.组织选择:脱钙前选择适当骨组织，锯成薄片，厚度2~5mm。

2.固定:常温下固定4~6小时，固定液体积要大于标本体积20~30倍。固定液最好选用可保存欲显示的组织成分的相应固定剂。

3.脱钙:将已固定的骨块置于已选好的脱钙液内进行脱钙，严格控制时间，及时更换新液。

4.酸的中和:保护骨组织不过度膨胀，不影响染色质量。

5.充分水洗:去酸，为以后脱水、透明、埋蜡打下基础。

骨组织脱钙应注意哪些问题?

1.首先应设骨脱钙专区。

2.取材厚度：骨组织脱钙时，取材骨块不宜过厚，一般在5mm 以内，以免脱钙时间过长影响染色效果 。

3.脱钙液量：液量要充足，一般为标本体积的20~30倍，并注意多次更换新液。

4.脱钙温度：在20℃左右为佳，不可过低，如温度过低(15℃以下)会引起损害，同时要注意，不是特别需要切勿将脱钙液加温，因酸类加温后容易破坏组织中的核酸而使染色不佳，即使加温亦不可超过37℃。

5.脱钙时间：应尽量缩短， 一般不超过三天(甲酸液),以免引起组织损害。

6.使用器皿：整个脱钙过程中切忌使用金属容器和器械，尽量采用玻璃器皿或塑料容器。

7. 固定要求：脱钙的骨组织最好先固定，后脱钙或脱钙固定同时进行，因为未经固定的骨组织脱钙后产生的破坏程度比固定后的骨组织要大得多。

8.脱脂处理：骨在脱钙前最好经脱脂处理，以减少对脱钙进度的影响，脱脂可用95%乙醇或三氯甲烷浸泡，骨组织经固定、脱钙后，下一步处理就是脱水。脱水是关键性步骤，它对骨的透明、浸蜡、 制片、染色都有很大影响，如果这一步处理不好，就会使整个制片工作难以完成。我们知道骨组织本身致密、坚韧，而脱水剂，特别是收缩性较强的脱水剂更能增加骨组织硬度。