类器官石蜡切片样品处理参考

   类器官（Organoids）指利用成体干细胞或多能干细胞进行体外三维（3D）培养而形成的具有一定空间结构的组织类似物。尽管类器官并不是真正意义上的人体器官，但能在结构和功能上模拟真实器官，能够模拟体内组织结构及功能并能够长期稳定传代培养。 相比传统的二维培养模型，类器官代表着一种能够概括整个生物体生理过程的创新技术，具有更接近生理细胞组成和行为、更稳定的基因组、更适合于生物转染和高通量筛选等优势。 因而在器官发育、精准医疗、再生医学、药物筛选、基因编辑、疾病建模等领域都有广泛的应用前景。今天重点介绍一下类器官进行石蜡切片前的样品处理：（仅供参考）

   取消化下来的类器官(肺泡灌洗液、消化下来的2D或者3D细胞等细胞悬液均可)，2800r 离心 5min，肉眼可见米粒大小的细胞沉淀最好，吸弃上清液，往EP管内加入1ml的4%通用型组织固定液(多聚甲醛固定液)，重悬细胞，常温固定15min，用封口膜封口，防止漏液，常温寄送实验室进行后续包埋切片染色。

具体操作步骤如下:

1.类器官收集（6孔板，收集3-4孔，大约1000-2000个类器官）

      移液器吸去培养基，每孔添加1-2ml左右，移液枪轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，4℃静置10min。300G   4℃离心5min弃去上清。加入1ml PBS重悬移入1.5ml离心管，300g 4℃离心5min弃去液体。

2.类器官固定

      加入1ml 4%多聚甲醛至EP管，轻柔吹打混匀，至于4℃固定1h。固定结束后，300G  4℃离心5min弃去上清。加入1ml PBS重悬移入1.5ml离心管，300G  4℃离心5min弃去液体。

3.类器官琼脂糖包埋

      称0.2至0.4g琼脂糖，加入至烧杯或者小试剂瓶内，加入10ml左右PBS。微波炉高火融化完全,待琼脂糖溶液降温至50-60℃，取20-50ul融化琼脂糖溶液，加入至1.5ml EP管重悬类器官沉淀，冰上放30min，待其凝固。(细胞悬液，肺泡灌洗液样本处理同上)