组织浸蜡和烤片的温度、时间对免疫组化染色有什么影响

  在免疫组化染色过程中染色强度的强弱或阳性表达率减少的最普通的原因，并不是免疫组化染色本身出现了问题，而是用作免疫组化染色的组织块在其制备最开始时其抗原发生改变所致。在研究组织块制备过程对免疫组化染色的影响时，以往考虑最多的是固定及固定液，往往忽视浸蜡温度，切片的烤片温度的影响。实验表明，浸蜡温度与浸蜡的时间对组织抗原尽管没有太明显的影响，但在经过高温浸蜡的组织，特别是浸蜡温度在80℃超过16小时的组织在免疫组化染色表达时，其阳性表达及阳性率均有明显的减少。

  在病理技术中石蜡组织切片烤片程序有两个目的，一是有利于组织切片的脱蜡，其次是将组织切片牢固地附贴于玻片上，使组织切片在整个染色过程中不至于从玻片上脱落，以及经烤片后的组织切片中的免疫反应活性能在常温下保存长久。在实验中发现55~60℃的温度烤片1小时，大多数的免疫反应活性均能很好地保存下来，但由于切片烤片时间短及烤片的温度较低往往在免疫组化染色过程中易从玻片上脱落，而这种情况的发生与组织的来源有关，如含脂肪，结缔组织较多的乳腺，子宫肌瘤等。在同样的温度下将烤片时间延长至过夜(12~16小时)出现这种现象为零，免疫反应活性也没有丢失。同样以70~80℃的温度下烤片，时间在2~3 小时以内，这种现象也很少发生，但经观察其免疫反应活性较55~60℃要低，与此同时组织切片的保存时间也较短(主要是组织切片的霉变与虫咬)，这可能与切片经高温烤片后组织上缺少一层保护蜡所致。

  在实验结果中不难发现，组织浸蜡的温度及时间长短对免疫组化染色结果的影响并没有像烤片那么严格，这与组织浸蜡时一般为隔水加温法有关。文献报道当因高温浸蜡影响了免疫组化反应活性时，在免疫染色前用1%硫酸锌水溶液加以处理能够得到完全恢复。