WB背景高的原因有哪些

原因

解决办法

抗体浓度太高

优化/降低一抗和二抗的浓度

抗体孵育温度过高

4℃孵育

二抗非特异性结合或与封闭剂交叉反应

设置二抗对照(不加一抗),降低二抗浓度

一抗或二抗与封闭剂有交叉反应

在孵育和洗涤液中加入Tween-20减少交叉反应.

封闭不充分

延长封闭时间，更换合适的封闭剂（脱脂奶粉，BSA，酪蛋白等）

抗体与其它蛋白质交叉反应

更换不同的封闭液；勿在含生物素体系中使用脱脂奶粉封闭；降低二抗浓度；检测二抗与膜的交叉反应性

洗膜不充分

增加洗涤次数

膜干燥

保证充分的反应液，避免出现干膜现象