病理染色--尼氏(Nissl)染色参考

   神经元细胞体包括一个具有皱褶核膜的大细胞核、稀疏的染色质和一个明显的核仁。在细胞体中细胞质是尼氏颗粒，即能够代表粗面内质网并在很多神经元中产生特异的斑点状嗜碱性表现的嗜碱性颗粒。尼氏颗粒可以用很多染色来显示如中性红、亚甲基蓝、甲苯胺蓝和甲基紫等。染色的变异、pH和分化的时间使一些染色既可以仅突出尼氏物质，也可以显示神经元的细胞核和神经胶质。各种神经细胞内都含有尼氏体，但其形状、数量、分布位置常常不同。尼氏体也存在于树突中，但不在于轴突和胞体的轴丘。尼氏体会因为生理状态的变化而变化，尼氏体是神经元内蛋白质合成的重要部位，当神经元受到刺激后，胞体内的尼氏体会明显减少甚至消失。尼氏体的存在和消失反应神经细胞是否受损害。当神经元受到严重损害时，尼氏体就溶解而消失，最后神经元坏死。

一,尼氏(Nissl)染色步骤

1.常规脱蜡至水（二甲苯I、二甲苯II各15min，然后梯度酒精脱水：100%I、100%II、95%、90%、80%、70%、50%各5min）；

2.蒸馏水冲洗3次，每次5min；

3.然后置于60℃温箱用1%甲苯胺蓝染色40 min(或用焦油紫染色30s)

4.蒸馏水洗净染料后，于分别置于70%，80%和95%以及100%乙醇中脱水，再用二甲苯透明

5.最后用中性树胶封片,及时全景扫描采集图像。

二,结果判读

尼氏体：神经元内的尼氏小体呈深蓝色颗粒，细胞核呈淡蓝色，背景淡蓝色。

三,注意事项

1、使用不同厂家的甲苯胺蓝粉剂配制的染色液，染色结果之间的差异比较大，

2、烤干封片后的颜色与镜检结果会有差异，紫红色部分会偏蓝。

四,分析参考

  文件夹用SlideViewer软件打开后可以 1-400 倍任意倍数放大后进行观察。选取组织目的区域进行 400倍成像，成像时尽量让组织充满整个视野，保证每张照片的背景光一致。存活的神经元细胞核大而圆，呈均匀淡蓝色或蓝色，核仁清晰，胞质丰富，分别对每个视野神经元进行计数;使用Image-ProPlus6.0分析软件，统一以毫米作为标准单位，测量视野面积，计算出单位视野内神经元数量=神经元的数量/视野面积。(仅供参考,也有其他分析方法)