石蜡包埋组织单细胞分散方法步骤

陕西依科生物从事各项病理技术服务多年，多年从事经验提示石蜡包埋组织的切片厚度。会影响单细胞悬液的质量，也会影响流式分析结果。要获得较满意的单细胞样品，切片厚度在40—50um较适宜；脱蜡要干净；消化时间要掌握好，并采取有效的去杂质碎片方法。

今天我们向大家介绍采用组织切片一胃蛋白酶消化法。

1、将石蜡包埋组织块在切片机上切去40—50um的组织片。

2、将组织片放入试管，加入3.0ml二甲苯脱蜡，一般在室温下脱1—2天。中间可换二甲苯一次，以确保石蜡脱净。检查石蜡是否脱净，可将二甲苯弃去，加入无水乙醇，如有白色絮状物浮起，表明石蜡未净。

3、梯度酒精水化：分别以100%、95%、70%、50水化组织片，每步10分钟，弃去酒精，加入蒸馏水5ml漂洗1—2次，3—5分钟后弃去。

4、胃蛋白酶消化：以生理盐水配制0.5%的胃蛋白酶，盐酸调pH值为1.5（新鲜配制，一周内为宜）。每个试管中加入胃蛋白酶消化液3—5ml，放入37℃恒温水浴锅孵育30分钟，每隔5—10分钟振荡一次。

5、终止消化：消化后，立即加入生理盐水至10ml，离心沉淀1500rpm，5分钟，弃上清，再加入生理盐水漂洗，以100目尼龙网过滤，除去未消化完的组织片，以短时低速离心沉淀，去上清，加入冰冷70%乙醇固定，放冰箱备检。

以上是石蜡包装组织单细胞分散的方法步骤。