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石蜡包埋组织单细胞分散方法步骤

发布日期:2020-1-6 11:05:00来源:http://www.sxyksw.com/news308865.html

详细介绍

陕西依科生物从事各项病理技术服务多年,多年从事经验提示石蜡包埋组织的切片厚度。会影响单细胞悬液的质量,也会影响流式分析结果。要获得较满意的单细胞样品,切片厚度在40—50um较适宜;脱蜡要干净;消化时间要掌握好,并采取有效的去杂质碎片方法。

今天我们向大家介绍采用组织切片一胃蛋白酶消化法。

1、将石蜡包埋组织块在切片机上切去40—50um的组织片。

2、将组织片放入试管,加入3.0ml二甲苯脱蜡,一般在室温下脱1—2天。中间可换二甲苯一次,以确保石蜡脱净。检查石蜡是否脱净,可将二甲苯弃去,加入无水乙醇,如有白色絮状物浮起,表明石蜡未净。

3、梯度酒精水化:分别以100%、95%、70%、50水化组织片,每步10分钟,弃去酒精,加入蒸馏水5ml漂洗1—2次,3—5分钟后弃去。

4、胃蛋白酶消化:以生理盐水配制0.5%的胃蛋白酶,盐酸调pH值为1.5(新鲜配制,一周内为宜)。每个试管中加入胃蛋白酶消化液3—5ml,放入37℃恒温水浴锅孵育30分钟,每隔5—10分钟振荡一次。

5、终止消化:消化后,立即加入生理盐水至10ml,离心沉淀1500rpm,5分钟,弃上清,再加入生理盐水漂洗,以100目尼龙网过滤,除去未消化完的组织片,以短时低速离心沉淀,去上清,加入冰冷70%乙醇固定,放冰箱备检。

以上是石蜡包装组织单细胞分散的方法步骤。