陕西依科生物技术服务有限公司主要从事病理技术服务、HE染色、石蜡包埋、组织切片、Masson染色等多项实验科研服务,同时公司具有先进的信息平台、严格的质控标准、专业的技术人员、成熟的营销网络及完善的售后服务。欢迎有需要的客户来电咨询我们。 咨询热线:13572593771
发布日期:2021/4/25 9:39:00来源:http://www.sxyksw.com/news600214.html
实时荧光定量PCR 可根据荧光染料的不同分为染料法和 TaqMan探针法两种;而根据数据分析方式又可以分为相对定量和绝对定量。这些不同的实验方法有不同的原理及应用。
1 SYBR-Green染料法:指在PCR反应体系中,加入荧光染料(SYBR-Green最为常用),进而监测荧光变化的实验方法。荧光染料SYBR-Green在游离状态不发射荧光。而在SYBR非特异性地掺入DNA双链后则发射荧光信号。从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR-Green仅与双链DNA进行结合,因此可以通过溶解曲线,确定PCR反应是否特异。
SYBR-Green染料法的优势在于方便快捷,无需探针故成本较低,但是对引物特异性要求较高,检测灵敏度相对较低。其结果多用于进行相对定量分析。
2 TaqMan探针法:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
Taq-Man探针法的优势在于特异性较高,重复性好,但是探针只能针对一个特定序列,且探针价格较高。这种技术可以用于检测基因突变检测进而进行遗传病筛查,癌症诊断及药物靶点筛选。结果多用于绝对定量。
1相对定量
分析特定样品相对于参考样品某个基因表达量的变化。主要在科研中使用,测量基因表达对各种处理(加药、造模、基因过表达、RNA干扰等)的应答。
2绝对定量
使用标准样品制作标准回归曲线,利用线性回归的方法进行绝对定量时,可以基于已知数量对未知数量进行定量。主要在临床检测中使用,将病毒拷贝数与疾病状态建立关联。并进行基因突变检测(可用于转基因食品检测、遗传病筛查、癌症早期诊断、靶向药靶点筛选)。
咨询热线
13572593771关注微信公众号
Copyright©www.sxyksw.com ( 点击复制 )陕西依科生物技术服务有限公司
病理技术服务哪家好?HE染色报价是多少?石蜡包埋质量怎么样?陕西依科生物技术服务有限公司专业承接组织处理、切片和染色等服务。咨询电话:13572593771
备案号:陕ICP备19021686号-1
热门城市推广: