各类涂片的制作

一，血涂片制作

  取新鲜血液（若用抗凝管收集的血液，放置最好不要超过24h，否则血液中的白细胞的数量以及种类会明显减少),选用粘附载玻片，用移液枪吸取10ul的血液，滴加在玻片的一侧(一般都是磨砂这边)，再取一片干净的载玻片（也可选用盖玻片，依据个人手的力道习惯选择）的，以30°-40°角，用其窄面靠近血液，会发现血液会沿着接触边缘向两边晕开，当两边都要到达边缘时，轻轻的稳健且匀速的向另一侧涂片，至距离另一侧2cm左右的距离，快速果断的拿走载玻片，可见图片首尾分明，厚薄均匀。一般情况下，涂抹速度力道适中的话，取走玻片时载玻片上的血几乎无残留，且涂抹出的血涂片无明显细胞破碎，变形，在显微镜下可观察到其细胞是单个紧密的排列，整体比较均匀。将涂好的血涂片自然晾干，放入切片盒内于4℃冰箱保存，要做时拿出可直接染色。切记涂片手法很重要，不可涂的过薄，白细胞数量会很少或者都残留在了尾端，也不可涂得过厚，细胞区分不清晰，部分区域血膜稍厚没关系，只要大部分视野都挺好的就行。

二，精子涂片制作

  取新鲜精液，选用干净的防脱玻片（载玻片），用组化笔画一个直径2cm左右的椭圆，用移液枪吸取100ul的精液置于圈内，用移液枪均匀涂满整个圈，放在摊片板内自然风干后入95%的乙醇固定15min,取出玻片自然晾干后常温寄送实验室。若没有条件自己做涂片，将精液的细胞悬液1200r/min，4℃离心5min后弃上清，留沉淀加入2ml的95%的酒精固定15min，常温寄送实验室。（如果没有离心机，请直接用每1ml的精子悬液，加入5ml的无水乙醇固定，常温寄送实验室）。

三，其他细胞悬液的涂片/滴片制备

   取细胞悬液，2800r离心5min，弃上清液，加入多聚甲醛固定（其他染色）或甲醇（瑞士-吉姆萨）混匀，常温固定30min以上即可。取固定好的细胞悬液，2800r离心5min，弃上清液，根据底部沉淀的细胞量加入适量PBS缓冲液进行稀释：一般肉眼看不见细胞沉淀时，用3000r/min，25℃离心10min，依然无沉淀时，直接留取底部约0.2ml的液体，混匀后用移液枪吸取200ul，涂于提前用组化笔画好的小圆圈中（直径约3cm的圆）；若细胞沉淀量很少，绿豆大小时，弃上清，留取底部沉淀，加入0.5mlPBS,用移液枪吹打混匀后，吸取200ul，涂于提前用组化笔画好的小圆圈中（直径约3cm的圆）；若细胞沉淀量很多，黄豆大小或更大时，弃上清，留取底部沉淀，加入2mlPBS,用移液枪吹打混匀后，吸取150ul，涂于提前用组化笔画好的大圆圈中（最大长边约5cm，最大短边约2cm的椭圆），在显微镜下观察细胞量的多少，若还是过厚，再用PBS对倍稀释该细胞悬液，直至在显微镜下观察到细胞量涂布均匀。用枪将细胞悬液铺满整个圆圈，涂片放置自然晾干。

四，细胞悬液琼脂包埋

取细胞悬液，2800r离心5min，弃上清液，加入多聚甲醛固定或甲醇混匀，常温固定30min以上即可。取固定好的细胞悬液，2800r离心5min，弃上清液,滴一滴品红标记细胞，溶解2%的琼脂糖，取热的琼脂1-2ml加入EP管，自然冷却即可。