陕西依科生物技术服务有限公司主要从事病理技术服务、HE染色、石蜡包埋、组织切片、Masson染色等多项实验科研服务,同时公司具有先进的信息平台、严格的质控标准、专业的技术人员、成熟的营销网络及完善的售后服务。欢迎有需要的客户来电咨询我们。 咨询热线:13572593771
发布日期:2024/1/19 12:48:00来源:http://www.sxyksw.com/news999895.html
目的
研究基因的表达和调控时,需要从组织或细胞中分离纯化RNA。RNA质量的高低经常影响RT-PCR、cDNA库构建和Northern Blot等分子生物学实验的成败。
主要试剂
Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶。
1. Trizol试剂含有苯酚,具有毒性和刺激性,注重操作。
2. RNase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉,注重配带手套,样品尽可能盖严。
3. 细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低最后得率,因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质(结缔组织和骨除外)。在清洗和裂解细胞时最好在低温下操作,防止在操作过程中释放的内源RNase降解了RNA。
4. 酵母和一些细菌由于细胞壁的特别结构,可以加入Trizol试剂同时加入无RNase的玻璃珠并剧烈振荡,使细胞裂解充分。
2-8℃ 避光保存一年。
预备工作
RNA酶(Rnase)是导致RNA降解最主要的物质。此酶非常稳定,在一些极端的条件下只可暂时失活,但限制因素去除后又迅速恢复活性。常规高温高压灭菌方法和蛋白抑制剂不能使所有的Rnase完全失活。
1.它广泛存在于人的皮肤上,因此制备RNA时必须戴手套
2.RNase的又一污染源是取液器。根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用以DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部,可基本达到要求。
3. 塑料制品、玻璃和金属物品的处理
(1)塑料制品:尽量使用一次性无菌塑料制品。已标明RNase-free的塑料制品,如没有开封使用过,通常不必再处理。
处理的步骤如下:
在玻璃烧杯中注入去离子水,加入DEPC使其终浓度为0.05%~0.1%(DEPC-H2O)。(DEPC二乙基焦碳酸酯为活性很强的剧毒物,须在通风橱中小心使用)
将待处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,注入DEPC-H2O,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,在通风柜中37℃ 或室温下处理过夜。
将DEPC-H2O小心倒入废液瓶中,将装有DEPC- H2O 处理过的塑料制品的容器以铝箔封口,高温高压蒸汽灭菌至少30分钟。
灭菌塑料制品烘烤干燥,置洁净处备用。
(2)玻璃和金属物品250 ℃烘烤3小时以上。
咨询热线
13572593771关注微信公众号
Copyright©www.sxyksw.com ( 点击复制 )陕西依科生物技术服务有限公司
病理技术服务哪家好?HE染色报价是多少?石蜡包埋质量怎么样?陕西依科生物技术服务有限公司专业承接组织处理、切片和染色等服务。咨询电话:13572593771
备案号:陕ICP备19021686号-1
热门城市推广: