石蜡包埋/石蜡切片

如何制作一张合格的组织切片？

1.一般的步骤是先取材，然后进行固定、脱水、包埋和切片，最后进行染色。

2.包埋的方法可以分为冰冻切片（OCT包埋）和石蜡切片（paraffin embedding）。

3.冰冻切片可以较好地保留组织的抗原性，但形态保留较差，一般用于原位杂交ISH和免疫荧光IF。冰冻切片的厚度一般为8~15μm。

4.石蜡切片一般用于HE染色或免疫组织化学IHC。石蜡切片的厚度更薄，一般为3-5um。

石蜡包埋和切片步骤：

1、取材

将新鲜组织固定于4%多聚甲醛中，固定时间至少为24小时。

在通风橱内使用手术刀修整目的部位的组织，将修整好的组织和相应的标签放入脱水盒中。

2、脱水

将脱水盒放入吊篮中，然后依次使用不同浓度的酒精进行脱水。

脱水的目的是除去组织中的水分，便于透明、浸蜡、包埋等步骤的进行，因为这些程序中所用的药品都不能与水混合，所以必须脱水。脱水过程应缓慢进行，不能操之过急或时间过长，以免组织变硬变脆或发生收缩现象。

按照以下顺序进行脱水：75%酒精4小时，85%酒精2小时，90%酒精2小时，95%酒精1小时，无水乙醇I 30分钟，无水乙醇II 30分钟，醇苯5-10分钟，二甲苯I 5-10分钟，二甲苯II 5-10分钟，蜡I 1小时，蜡II 1小时，蜡III 1小时。

3、包埋

将脱水后的组织放入包埋机中进行包埋。

首先将融化的蜡放入包埋框中，在蜡凝固之前从脱水盒中取出组织，并按照包埋面的要求放入包埋框中，并贴上相应的标签。将包埋框放置于-20℃的冻台上冷却，待蜡凝固后取出蜡块，并修整蜡块的形状。

4、切片

将修整好的蜡块放在石蜡切片机上进行切片，每片厚度为4μm。

切片漂浮在40℃的温水上，将组织展平，然后用载玻片将组织捞起，并放入60℃的烘箱中烘干。待水分蒸发并蜡块烤化后，取出并在常温下保存备用。

二、注意事项：

1、组织要尽量使用新鲜的，冻过的组织不太适合用来包埋，因为冻结可能会改变组织的结构。如果需要进行短途运输，最好使用干冰而不是液氮。

2、组织块的大小可以根据组织的特性进行调整。固定剂应有足够的量，一般为组织块体积的10∽15倍。

3、在切割组织块时，刀片一定要保持锋利，并及时更换。切割时应保持单方向切割，以防止损坏组织。

4、固定时间会因材料的大小和所使用的固定剂种类而有所不同。固定时间可以从1小时到几小时不等，有时候可能需要在中途更换固定剂。某些固定剂对组织有较强的硬化作用，因此固定时间应该严格控制，不能过长。