HE染色常见问题及解决方案

一、着色异常（过深或过浅）

着色不当常因染色时间控制不当所致。HE染色需借助镜检来精确控制时间，预实验可帮助确定最佳染色时长。通常，新鲜苏木素的染色时间约为1-3分钟，分化时间亦需适中，过度分化后可通过水洗并复染苏木素来调整。

二、切片清晰度问题（雾化、斑点）

烤片温度或时间不足，导致脱蜡不彻底，切片上留有白色斑点。应提高烤片温度或延长烤片时间。

脱水步骤不当，切片上残留水分引起雾化。需优化脱水流程，特别是在低浓度乙醇中停留时间应较短，随着乙醇浓度升高，脱水时间逐渐延长。

盖玻片上封固剂残留，影响切片清晰度。此时需重新封片以消除影响。

组织自溶、固定不及时或固定液浓度不足，以及固定前组织干枯，均可能导致染色后灰染现象，且难以补救。

固定剂不仅具有媒染作用，能与蛋白和染料结合增强着色，还能沉淀和凝固细胞内成分，产生光学差异。因此，固定不良是切片染色模糊的主要原因。

淋巴结等细胞密集、结构复杂的组织，在固定时易因固定液渗透不均而导致中央部分固定不佳，出现发灰现象。可采用无水乙醇与乙醚等量混合液处理切片5-10分钟，随后用乙醇和水洗涤，再用3%硫酸铁铵溶液补充媒染5分钟，以改善染色效果。

三、染色切片出现黑色杂质与气泡问题

杂质主源为苏木素染液中的金属膜附着载玻片，建议每日染色前严格过滤苏木素染液，或采用半氧化苏木素以减少杂质。

切片脱水环节若梯度乙醇处理不彻底，会导致封片后水分残留及气泡产生，需确保脱水完全。

四、细胞核呈现棕色问题

原因在于苏木素染液过度氧化或返蓝时间不足。染色前应验证苏木素活性并适时更换，同时适当增加返蓝时间以纠正颜色。

五、切片染色不均的解决策略

组织固定不当可致染色不均，如组织过大过厚致固定不充分，应确保标本以4%中性甲醛充分固定，且固定液体积需为标本四倍，大标本需分割固定。

切片质量影响染色均匀性，切片刀损伤会导致切片断裂、不完整，倾角不当则引起切片卷曲或皱褶，设备螺丝松动或操作手抖均可能造成切片厚薄不一或产生横纹，需定期检查切片器械并稳定操作。

组织处理流程中的脱水、透明、浸蜡步骤需严格控制，乙醇浓度不足导致脱水不彻底，二甲苯浸泡过久使组织变脆，浸蜡温度过高亦影响切片染色效果，均需按规范操作以避免染色不均。