1．固定法：

固定就是用人为的方法尽可能使组织、细胞的形态结构和化学成分保持生活状态，防止组织细胞死亡后发生自溶和组织腐败。

固定方法：

①浸入法：从人体或者动物身体上取下一小块组织，用PBS或者生理盐水把组织上面的血冲洗干净，然后放10%的中性福尔马林或者4%多聚甲醛固定24-48小时，进行送检；通常标本体积与固定液的比例为1:10-1:20，取材大小为1.0-1.5cm*1.0-1.5cm，厚度2-3mm左右，固定的容器要相对大一些，防止固定后大于容器难以取出，造成组织破坏，影响组织结构。

②灌注法：组织块体积大或固定液极难渗入内部，可将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而充分固定。该法普遍应用于脑部疾病的科学研究。利用天然血管网，快速、均匀地保存标本，以保持标本类似活体状态、尽量保持抗原性。 做免疫实验之前尽量用灌注法，可以避免红细胞太多，影响实验结果。

2．冻存法：

冰冻样本能够较好的保存组织的抗原免疫活性，其制作过程较石蜡切片快捷、简便，缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散。冰冻法多应用于手术中的快速病理诊断。

a)动物组织需尽快取材保存，取材应在冰上进行，取材后组织用生理盐水冲洗干净，去除血渍和污物，并剔除非研究所需的组织;

b)吸干水渍并切小块，放入已标记的保存容器中，液氮速冻后，转运至-80℃冰箱保存，运输时请使用大体积干冰运输。

一、常规取材固定注意事项

l 固定要及时  主要取之于活组织检查标本、动物模型组织标本、解剖标本均为新鲜组织夹取标本时用无齿镊以免对组织造成人为损伤，如机体死亡2h以上的组织可能有不同程度的自溶，其抗原可能发生变性、消失或严重弥漫现象，因此需要快速固定处理以免影响免疫组织化学标记效果。

l 固定温度  常温即可，无需冷藏，切勿冷冻结冰，否则固定液结冰形成冰晶严重破坏组织形态结构。

l 刀具要锋利  防止人为因素影响切取标本时应用锋利的刀剪。

l 大小适宜  一般标本取的组织块厚度约为0.2~0.3cm，可根据性的略作调整，大小以1.5cm*1.5cm*0.2~0.3cm为宜，应于免疫组化的组织以1cm*1cm*0.2cm为好，不要太大，以免浪费试剂。

l 速度要快  取材时间要短，一些特殊的组织取材前要先灌注，比如脑组织。

l 特殊处理  取材应避免取过多坏死组织或凝血块，组织上如果有血液、粘液、粪便等污物要先处理干净在取材，以免影响后期切片。

l 固定液的选择  根据组织的不同选取合适的固定液