免疫组化染色的过期抗体如何处理?

  免疫组化染色已广泛应用于临床病理诊断，成为判断肿瘤来源及预后的重要手段之一。但在基层医院病理科，由于肿瘤标本较少，每次免疫组化染色所使用的抗体量较小，且免疫组化染色的间隔时间较长，因此常导致抗体过期而遗弃，造成很大的浪费，从而影响了该项技术在基层医院的进一步普及应用。这里推荐一种可增加过期抗体的使用浓度并延长其孵育时间的方法，可获得满意效果。

1.操作方法:

(1)适用抗体:多克隆一抗:过期抗体为保存在4℃冰箱、超过有效期6~12个月抗体。

(2)切片常规脱蜡至水，并经微波炉处理修复抗原。

(3)组织切片用低稀释度的过期抗体，滴加一抗后，室温放置30分钟后，于4℃冰箱，24小时。

(4)PBS冲洗后，常规滴加生物素化的二抗及ABC复合物。

(5)DAB显色,苏木素复、脱水、透明、封固。

2.结果判定:实验表明在降低抗体的稀释度及适当延长第一抗体孵育时间的条件下,过期抗体的免疫组化染色的阳性反应结果与有效期内抗体的较为一致，且背景清晰，无交叉反应及非特异性着色，虽然过期抗体免疫组化染色的阳性强度略低于有效期内抗体，但不影响结果判断。

3.此法原理:过期抗体导致的免疫组化染色失败，主要原因是由于抗体的长期存储致使效价的降低，第一抗体的有效浓度降低，致使整个免疫组化染色过程不能有效进行。通常情况下，延长抗体的孵育时间可使高稀释度的抗体正常工作，达到较好的染色效果。采用增加抗体浓度和适当延长抗体孵育时间的方法，可使多种过期抗体的免疫组化染色取得了阳性信号强、特异性高、对比好及无背景染色等令人满意的效果。此法不仅适用于浓缩抗体，也适用于部分即用型抗体(延长抗体孵育时间，如ER、PR等即用型抗体)。本方法的技术关键是选择恰当的稀释浓度及适当的孵育时间，否则，会出现假阴性的结果或背景染色过重的现象。因此，染色前的预实验是染色成功与否的关键。最佳稀释度可用棋盘法测定。最佳孵育时间可通过先预设几种孵育时间，进行预试验，即可得到染色效果佳且背景染色少的孵化时间。一般情况下，过期抗体的孵育时间较正常抗体长4-5小时。

4.本法优势:本方法简单易行，易于掌握，有效地减少因免疫组化标本量少所造成的试剂浪费,使免疫组化染色在广大基层医院病理科进行成为可能，有助于其提高病理诊断水平，值得推广。