组织块染的糖原 PAS 方法如何操作

   糖原是动物组织内唯一的天然多糖，广泛分布在体内各种细胞中，尤以肝脏最为丰富，对维持细胞恒定及其他生理功能有重要关系。PAS反应是显示组织、细胞内糖类物质的经典方法，PAS技术的关键是糖原被过碘酸氧化释放出醛基时，是否有足够的醛基与碱性品红发生反应。而传统切片染PAS反应显示糖原步骤繁琐，且小分子颗粒的糖原很容易在制片过程中丢失，给观察、定位、定量分析带来困难。整块染色方法具有步骤少、操作简便、反应稳定、定位清楚等特点，能减少染的切片中因固定液渗透使糖原偏居于细胞一侧的现象，而且此方法利于教学和科研大量制片和病理临床诊断。

   在PAS整块染色法操作过程中一般采用固定与氧化同时进行，该方法的染色效果仍不太理想。原因是仍采用固定与氧化同时处理的方法，PAS阳性反应较弱，阳性颗粒边缘深，中间浅，颗粒分布不均匀。为解决这一问题，采用了将固定与氧化步骤分开进行的方法，结果显示PAS反应效果更好，糖原颗粒清晰，染色均匀，细胞形态结构清楚，胞核无色。此法中还发现，过碘酸氧化的时间对结果也有重要的影响，氧化时间过长，可引起非特异性反应(人工假象)。组织块整块氧化时间以24小时为佳，阳性反应强，背景淡。此外，组织块经Schiff剂染色后，一定要进行充分流水冲洗，置换组织内的Schiff剂，阻断Schiff剂与细胞内的糖原继续反应，流水冲洗至少24小时。

糖原（PAS）染色实验步骤

1.石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ8min-无水乙醇Ⅰ 6min-无水乙醇Ⅱ6min-95%酒精 6min-85%酒精 6min-75%酒精 5min-流水冲洗；

2.滴加过碘酸氧化10min；

3.自来水冲洗1次，再用蒸馏水冲洗2次；

4.滴加雪夫试剂10-20min，镜下观察；

5.流水冲洗10min；

6.苏木素染核5min，流水冲洗；

7.分化液分化，流水冲洗返蓝；

8.无水乙醇脱水，二甲苯透明；

9.中性树胶封片。