石蜡切片实验中常见问题、原因及具体处理方案

石蜡切片实验中常见问题、原因及具体处理方案

1. 切片破碎、无法连续展片

- 原因：组织脱水、透明、浸蜡不充分；蜡块过硬或过软；刀片不锋利。

- 处理：重新规范脱水透明流程（确保梯度乙醇脱水彻底，二甲苯透明时间适中）；浸蜡时保证蜡液温度稳定在 56-60℃，延长浸蜡时间至 2-3 次、每次 1-2 h；蜡块过硬可 37℃温箱软化，过软则冷藏硬化；及时更换或研磨刀片。

2. 切片出现皱褶、气泡

- 原因：展片水温过低；组织固定不佳收缩；捞片时操作不当。

- 处理：展片水温控制在 42-45℃（根据组织类型微调），水面保持洁净；固定时选用 10% 中性福尔马林，固定时间 12-24 h；捞片用镊子轻拉切片展平，避开气泡后再贴附载玻片。

3. 脱蜡不彻底，IHC/WB 后续染色背景深

- 原因：二甲苯脱蜡时间不足；二甲苯试剂老化失效。

- 处理：二甲苯脱蜡分 3 缸，每缸 10 min，确保试剂新鲜；脱蜡后经梯度乙醇（100%→95%→85%→75%）复水，每步 5 min，避免直接入水。

4. 切片脱片（染色或洗脱过程中脱落）

- 原因：载玻片未清洁或未包被粘附剂；烤片温度/时间不足。

- 处理：载玻片用酸洗液浸泡后清水冲洗干净，烘干后涂多聚赖氨酸或 APES 粘附剂；切片贴附后 60℃烤片 2-4 h，或 37℃过夜烤片。