免疫组化实验原理及流程

一、核心原理：抗原-抗体特异性结合

三步反应链：

1. 一抗特异性识别组织中的目标抗原

2. 二抗结合一抗的Fc段，带标记物

3. 标记物（HRP/AP）催化底物显色

关键概念：

直接法：一抗直接带标记，少一步但信号弱

间接法：二抗放大信号，最常用

SP法/ABC法：生物素-链霉亲和素系统，进一步放大

二、IHC完整实验流程（石蜡切片）

抗原修复的方法及修复液的选择

 DAB显色（在镜下观察，别计时）

正确操作：

DAB试剂现配现用，滴加后立刻放显微镜下观察；

看到特异性部位出现棕黄色，背景还没脏的时候，立刻拿下来泡水里终止；

显色时间一般30秒到5分钟，每个片子都不一样，不要计时！

显色太浅：                            

• 抗原修复不够

• 一抗浓度太低或孵育时间不够

• DAB试剂失效

• 显色时间太短

背景太深：

• 一抗浓度太高

• 封闭不够

• 洗涤不充分

• DAB显色过久