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荧光定量PCR技术常用术语

发布日期:2021/7/9 14:48:00来源:http://www.sxyksw.com/news645804.html

详细介绍

荧光定量PCR技术广泛用于分子生物学等领域。在了解荧光定量PCR如何对初始模板进行定量之前,需要了解几个在荧光定量PCR分析中常用的术语:

基线:实时荧光定量PCR反应的基线是指在PCR的最初几个循环中(一般为3-15个循环)的信号水平。此阶段的荧光信号变化量极小。低水平的基线信号相当于反应的背景或噪声。每个实时荧光定量PCR反应的基线应通过用户分析或扩增曲线自动分析,根据经验确定。基线的设置,会影响到荧光阈值及Ct值。

荧光阈值:荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值,它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上,一般荧光阈值默认是PCR 3-15个循环荧光信号标准偏差的10倍。

Ct值:Ct值指的是PCR扩增过程中扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的循环数。

标准曲线:标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之间的函数关系。对已知拷贝数的标准样品做系列稀释,对不同稀释度的标准样品进行荧光定量PCR并记录Ct值,根据Ct值及拷贝数的对数绘制得到标准曲线,标准曲线的纵坐标代表起始拷贝数的对数,横坐标代Ct值。