免疫荧光染色操作注意事项

免疫荧光染色的详细步骤及其注意事项：

（1）选取一抗时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于rabbit和rat的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti-rat-Tex-Red（红）。

（2）做法是两种一抗同时孵育，然后两种二抗同时孵育。抗体浓度、孵育时间要仔细摸索，感觉一抗4度孵育过夜比较好，背景比较清晰。

（3）阳性对照用的是阳性组织切片，阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG，荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。

（4）封闭血清与二抗来源动物一致，用的是10%的正常donkey血清。

（5）其余步骤同一般免疫荧光单标操作。