Von Kossa硝酸银法

简 介：

钙在人体内大量存在，构成骨骼作为支持人体的支架，在分泌、运送、肌肉收缩、神经传导等也起重要作用。许多染料可以于钙形成螯合物，包括茜素红S、红紫素、核固红等。茜素红S属一种蒽醌类衍生物，是茜素磺酸钠盐，它能与碳酸钙或磷酸钙中的钙盐螯合形成橙红色复合物。钙盐染色常用方法有硝酸银法和茜素红S法，钙盐染色试剂盒(Von Kossa硝酸银法)原理在于该法是一种金属置换法，硝酸银溶液作用于含有不溶性钙盐的切片时，钙被银所置换，银盐在光的作用下被还原为黑色金属银，适用于大量样本的钙盐组织染色。

操作步骤：

1、组织固定于10%中性福尔马林，常规脱水包埋。

2、切片厚度5μm，常规脱蜡至水。

3、蒸馏水洗1min。

4、切片入Von Kossa硝酸银溶液强光照射15-60min。

5、蒸馏水洗1min。

6、入海波溶液处理2min。

7、HE染色液或Van Gieson复染细胞核。

8、常规脱水透明，中性树胶封固。

阴性对照(可选)：

取另外一张连续切片脱蜡至水，置于Von Kossa对照液处理20min，流水冲洗5min.与实验片一同入Von Kossa硝酸银溶液，其余步骤同上。

染色结果：

钙盐黑褐色至深黑色

细胞核根据复染液不同而不同

背景红色

注意事项：

1.钙盐组织固定以中性福尔马林为佳。

2.作用时间取决于阳光照射时光的强度和时间。

3.若暴露于紫外灯下，则应缩短照射时间，一般5-10min即可。

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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