LFB(髓鞘）染色方法及注意事项

LFB(髓鞘）染色方法及注意事项由陕西依科生物为您解答：

一、实验方法原理

劳克坚牢蓝(LuxolFastBlue,LFB)属于铜－酞箐染料，在酒精溶液中具有与髓鞘磷脂结合的染色特性。应用LFB髓鞘染色可以很好地显示出神经组织的髓鞘结构。

二、实验步骤

1.石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ8min-无水乙醇Ⅰ 6min-无水乙醇Ⅱ6min-95%酒精 6min-85%酒精 6min-75%酒精 5min-流水冲洗；

2.切片经蒸馏水清洗后，入0.1% LFB溶液，于60℃密封浸染8-16h；

3.经蒸馏水清洗后，入95%酒精；

4.以0.05%碳酸锂水溶液分色10s以上；

5.经70%酒精继续分色，直至显微镜下观察灰、白质区分清晰为止；

6.蒸馏水洗片后，苏木精-伊红复染；

7.70%酒精将复染颜色分至细胞核及尼氏体呈红色；

8.滤纸沾尽多余液体，入正丁醇2次漂洗脱水，每次脱水时间3-5min；

9. 二甲苯透明，中性树胶封片。

三、染色结果判读：髓鞘呈鲜蓝色，背景呈红色。

四、注意事项

(1)切片若为石蜡切片，要在二甲苯中先脱蜡，再至无水乙醇。

(2)0.05%碳酸锂水溶液分色应该在显微镜下进行，至背景呈灰色为止。70%酒精再次分色时，至背景无色为止。

其他

(1)LFB染色完后，可用焦油紫溶液或苏木素－伊红复染，这样能更好地显示出细胞的形态。

(2)复染之后要入正丁醇漂洗脱水，这样染色效果更佳。

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