TRAP染色实验步骤

一、实验原理   

酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同， 酸性磷酸酶的适宜pH 为4.5-5.5。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶  (Tartrate-resistnt acid phosphatase,TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液。血液中的TRAP 绝大多数 来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP 了解破骨细胞的功能状态。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色以萘酚AS-BI为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中，若细胞内的ACP 有抗酒石酸的活性，则呈阳性反应。

二、TRAP染色实验步骤

1.石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ8min-无水乙醇Ⅰ 6min-无水乙醇Ⅱ6min-95%酒精 6min-85%酒精 6min-75%酒精 5min-流水冲洗；

2.自然晾干， TRAP 固定液2-8℃固定30s-3min, 多数情况下30-60s即可；

3.水洗，稍微晾干(不宜过分干燥)。

4.切片入TRAP 孵育液，置于37℃温箱，浸染45-60min,水洗。

5.复染：苏木素染色液染色5-8min，分化液分化3-5s 。

6. 水洗、脱水、透明、中性树胶封片。

三、染色结果判读：阳性颗粒呈紫红色，细胞核呈蓝色或绿色。

临床意义：

1、 毛细胞白血病的毛细胞ACP 染色呈强阳性或中度阳性，且不被酒石酸抑制，其他细胞均呈阴性或极 弱阳性。

2、 急性白血病幼单核细胞ACP 染色呈阳性，原淋巴细胞呈弱阳性，原粒细胞对ACP 反应不一。

3、T 淋巴细胞 ACP 染色呈阳性，颗粒粗大、分布密集。 B 淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的弱阳性。

4、 戈谢细胞呈强阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。

注意事项：

1、TRAP孵育液易失效，本法宜用皮肤穿刺血涂片，晾干后应及时染色

2、 对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。

3、 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。

4、 组织固定需在2-8℃冰箱进行，时间不宜超过24h, 否则酶活性会减弱或消失。

5、 组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52-52-8℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短， 否则酶活性会减弱或消失。

6、 不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR 级以上的二甲苯。

7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

实验结果展示