普鲁士蓝染色实验步骤

一、普鲁士蓝染色实验原理

实验原理 含铁血黄素（Hemosiderin）是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其含铁、金黄色，故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体酶的作用下，血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。Perls 普鲁士蓝反应（Prussian blue reaction）又称为含铁血黄素染色，即经过亚铁和稀酸处理后可以产生蓝色，常见于吞噬细胞内会间质内，主要显示三价铁盐。Perls 普鲁士蓝是非常经典的组织化学反应，是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法，其染色原理为：亚铁qing hua jia溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来，三价铁与亚铁反应，生成一种不溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁物普鲁士蓝，所以该反应被称为普鲁士蓝染色反应。三价铁的是一种很稳定的化合物，在反应后可用红色染色剂进行复染，如核固红、伊红、中性红等。 

二、普鲁士蓝染色实验步骤：

1.石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ8min-无水乙醇Ⅰ 6min-无水乙醇Ⅱ6min-95%酒精 6min-85%酒精 6min-75%酒精 5min-流水冲洗；

2.普鲁士蓝染色:将亚铁青化钾溶液和盐酸溶液等比例混合成普鲁士蓝染液，切片入染液中染色1h,蒸馏水洗2遍；

3.核固红染色:核固红染液染色1-5min,流水冲洗；

4.脱水、透明：无水乙醇脱水，二甲苯透明；

5.封片： 中性树胶封片。

6.镜检拍照：显微镜镜检，图像采集分析。

三、染色结果判读：铁离子呈蓝色，细胞核呈红色。

四、注意事项：

1.避免使用酸性固定剂，铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。

2.整个操作过程中容器要干净，避免用金属铁制品，洗切片和容器时以蒸馏水为宜，因普通水内含铁质。

3.细胞外铁需用含有骨髓小粒的涂片。

4.Perls stain染色时，应根据样本情况调整着色时间。

5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

结果展示