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发布日期:2023/6/8 15:58:00来源:http://www.sxyksw.com/news947620.html
一、普鲁士蓝染色实验原理
实验原理 含铁血黄素(Hemosiderin)是一种血红蛋白源性色素,为金黄色或棕黄色颗粒,因其含铁、金黄色,故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后,在溶酶体酶的作用下,血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。Perls 普鲁士蓝反应(Prussian blue reaction)又称为含铁血黄素染色,即经过亚铁和稀酸处理后可以产生蓝色,常见于吞噬细胞内会间质内,主要显示三价铁盐。Perls 普鲁士蓝是非常经典的组织化学反应,是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法,其染色原理为:亚铁qing hua jia溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来,三价铁与亚铁反应,生成一种不溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁物普鲁士蓝,所以该反应被称为普鲁士蓝染色反应。三价铁的是一种很稳定的化合物,在反应后可用红色染色剂进行复染,如核固红、伊红、中性红等。
二、普鲁士蓝染色实验步骤:
1.石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ8min-二甲苯Ⅱ8min-无水乙醇Ⅰ 6min-无水乙醇Ⅱ6min-95%酒精 6min-85%酒精 6min-75%酒精 5min-流水冲洗;
2.普鲁士蓝染色:将亚铁青化钾溶液和盐酸溶液等比例混合成普鲁士蓝染液,切片入染液中染色1h,蒸馏水洗2遍;
3.核固红染色:核固红染液染色1-5min,流水冲洗;
4.脱水、透明:无水乙醇脱水,二甲苯透明;
5.封片: 中性树胶封片。
6.镜检拍照:显微镜镜检,图像采集分析。
三、染色结果判读:铁离子呈蓝色,细胞核呈红色。
四、注意事项:
1.避免使用酸性固定剂,铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。
2.整个操作过程中容器要干净,避免用金属铁制品,洗切片和容器时以蒸馏水为宜,因普通水内含铁质。
3.细胞外铁需用含有骨髓小粒的涂片。
4.Perls stain染色时,应根据样本情况调整着色时间。
5.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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