实验动物肠组织取材和染色

肠道是最大的免疫器官，肠道免疫功能占全身免疫功能的70%左右，是人体机体防御的最前线。肠道免疫包括三部分：上皮内淋巴细胞、固有层和黏膜下层的淋巴小结。其中有较多T细胞，能分泌白细胞介素等细胞因子，对身体的免疫监视、清除病菌及阻止病菌对黏膜的侵害等方面有重要作用。分泌免疫球蛋白的细胞80%分布在肠道，而全身90%的循环免疫球蛋白直接作用于肠腔。平时少吃刺激性的辣椒、辣酱、芥末等，以免肠道黏膜受到刺激，引起免疫功能下降，从而容易感染细菌或病毒，诱发多种的肠道疾病。

一、确认肠的定位（自己需要取哪一段）

二、取材注意事项

1)确定好自己要取的位置

2)做病理切片的话，直接取材后，内容物清理干净（动作要轻柔，避免损伤绒毛），用4%多聚甲醛固定，以防后期切片有刀痕，制作好的蜡块后续可以继续做免疫组化或免疫荧光。做WB、PCR实验，新鲜组织取材清理干净肠道内容物（pbs或生理盐水清洗都行）放在-80当中。尽量保证同一实验取同样的位置。

3)取材方向：常规横切圆环，如果有溃疡、肿瘤可以做瑞氏肠卷。

三、常做的染色

四、肠道结构与特点

黏膜：形成许多纵行皱襞，上皮为单层柱状上皮；固有膜内含大量肠腺，上皮与固有膜形成许多小肠绒毛；黏膜肌层为内环外纵两层。黏膜下层：疏松结缔组织，有十二指肠腺分泌碱性黏液。

肌层：内环、外纵平滑肌。

绒毛：是小肠黏膜表面特有的指状突起。

上皮：①柱状细胞：有纹状缘，起消化吸收作用。②杯状细胞：分泌黏液。③银亲合细胞：内分泌细胞，产肽、胺类。

固有层：结缔组织，内有一条中央乳糜管，吸收乳糜微粒。

肠腺(隐窝)：①柱状细胞：消化和吸收能力强。②杯状细胞: 产黏液③内分泌细胞: 激素④潘氏细胞

小肠各段的特点：

1.十二指肠：绒毛密集，柱状、杯状细胞少，黏膜下层有十二指肠腺。

2.空肠：绒毛密集，柱状、杯状细胞增多，有淋巴小结 。

3.回肠：绒毛细而少，杯状细胞更多，淋巴小结增多。

大肠特点：

1、黏膜无皱襞和绒毛；

2、柱状细胞的微绒毛变短，纹状缘不明显；

3、杯状细胞特别多，但无潘氏细胞；

4、肠腺特别发达，分泌碱性黏液，无消化酶，但有溶菌酶；

5、肌层发达，形成纵肌带。

五、肠组织常做免疫组化免疫荧光指标

c-kit，GLP-1，ZO-1，claudin，occlaudin