实验动物大小鼠灌注方法参考

一,背景技术

      在实验动物组织病理学实验研究中，特别是进行原位杂交和免疫组化研究，为避免或减少死后组织形态及结构发生变化，常于动物处死前，采用灌注固定法。灌注固定即通过血管途径将固定液导入所需固定的组织器官内，将活的细胞在原位及时迅速固定，再摘取样品。

二,实验原理

      心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死之前进行组织的前固定，避免了组织的自溶现象。多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变,从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。

三,实验前准备

      实验器具: 剪刀1把，眼科剪1把，镊子1把，0.5ml的注射器1个，大头针4个 (可用针头替代)，解剖板1个，止血钳2把，灌注机1整套，止血夹1个，断头台1个，离心管1支，废液缸1个，水合氯醛1瓶，生理盐水1瓶，4%多聚甲醛1瓶。

四,实验步骤

1、老鼠麻醉后立即将其用针头固定在泡沫板上(用针头插住四肢)。用镊子扯起胸部皮肤，另一只手用剪刀剪开胸腔的皮肤和肋骨，暴露出心脏和肝脏。

2、将注射针头插入老鼠左心室，同时将老鼠肝脏减掉，以使血液流出。灌注生理盐水，时间维持在 1分钟 (10~20ml) 灌注液左右，血液排除后,四肢、肝脏和舌头会变白。

3、待老鼠四肢、肝脏和舌头变白之后，用 4%PFA 灌流固定当 PFA 流至大脑处可能会使老鼠尾巴略有反射现象(有时可能没有)，此时可将灌流速度下调，以使固定更加充分。整个 PFA 灌流时间约为 5min。(固定原理: 多聚甲醛可以使蛋白质交联)

4、将导管始端从 PFA 中拿出，待管中液体流尽后，将心脏上的针头拔下，如果固定的较好，可发现老鼠眼球呈现白色。将托盘中的血液倒至废液桶内，并准备下一步的取其他组织的操作。