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大、小鼠灌注取材的方法

发布日期:2024/10/25 12:48:00来源:http://www.sxyksw.com/news1044109.html

详细介绍


一、背景技术

      在实验动物组织病理学实验研究中,特别是进行原位杂交和免疫组化研究,为避免或减少死后组织形态及结构发生变化,常于动物处死前,采用灌注固定法。灌注固定即通过血管途径将固定液导入所需固定的组织器官内,将活的细胞在原位及时迅速固定,再摘取样品

二、实验原理

      心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死之前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象。多聚甲醛使组织蛋白发生交联,以保持蛋白的原位和表面结构不变,从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。

三、实验前准备

      实验器具: 剪刀1把,眼科剪1把,镊子1把,0.5ml的注射器1个,大头针4个 (可用针头替代),解剖板1个,止血钳2把,灌注机1整套,止血夹1个,离心管1支,废液缸1个,水合氯醛1瓶,生理盐水1瓶,4%多聚甲醛1瓶。

四、实验步骤

1、先把老鼠麻醉,沿胸骨柄剪开胸腔,剪开心包膜,暴露心脏,。

2、与心尖呈30-45°夹角剪开左心室,将灌注针从左心室插入主动脉,固定针头,再剪开右心耳,然后快速用生理盐水(大鼠100-150ml)冲洗血液,至流出液体血色较浅基本澄清(肝脏、眼珠、爪子迅速变白是排除血液的有效观察标志)。

3、再先快后慢注入4%多聚甲醛250ml(大鼠)固定,先后所需50min,多聚甲醛进入大鼠体内,大鼠会出现四肢、尾的抽搐,最终以肝脏发白、内脏鼓起即灌注好。

4、然后取材,取完后的脑组织再放置4%多聚甲醛中4度冰箱进行后固定,时间12-24小时。。


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