免疫组化实验中如何最大限度地降低组织非特异性染色？

免疫组化实验中如何最大限度地降低组织非特异性染色？

1.缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条；

2.一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议用单克隆抗体看看；

3.内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；

4.非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；

5.缩短 DAB 孵育时间或降低 DAB 浓度/过氧化氢浓度等；

6.适当增加 PBS 冲洗次数和浸洗时间，在一抗、二抗或 SP 孵育之后的浸洗尤为重要；

7.防止标本染色过程中出现干片，这容易增强非特异性着色。