常见实验动物石蜡制片易出现问题有哪些?应如何应对?

实验动物石蜡制片有其特殊之处，因其在取材制作中都有一些特殊的操作，故而制作中出现一些问题是十分正常的，但出现问题后要有弥补的方法。

1.问题一:制片质量参差不齐，同一拨切片，质量有好和坏。

(1)出现原因:不同种属的动物组织，不同脏器组织共用一套处理程序。

(2)应对方法:不同种属的动物组织，在脱水、透明、浸蜡时应尽量单独处理。有条件时同属的不同脏器组织最好也分批处理，以利于条件的掌握。

2.问题二:切片出现裂隙，组织发生强烈的收缩和脆化。

(1)出现原因:各段脱水时间操之过急，加温脱水，未及时更换新液。

(2)应对方法:动物组织块较小、质地较细嫩，脱水时应从50%或60%乙醇较低浓度开始。脱水的低浓度乙醇时间长短均可，低浓度乙醇的时间应视材料的大小、被膜是否完整而定，各段时间不能操之过急，总的不能少于3小时，最好在70%乙醇中过夜，否则在无水乙醇中会引起组织骤然收缩，切片出现裂隙，为避免在低浓度乙醇逐级移动时损坏组织，用小纱布块将材料包好系线提移，到90%乙醇时除掉纱布包，无水乙醇一定要准备两瓶，在第2瓶中放1个装有无水硫酸铜的玻璃管(两端用脱脂棉塞好)，使组织达到彻底脱水。脱水瓶中各级乙醇量与组织块体积之比约为60:1较好。温箱内加温脱水，会使组织发生强烈的收缩和脆化，所切组织易产生裂隙、疏离。系列乙醇，特别是90%乙醇和100%乙醇在应用时，应定期更换，否则乙醇浓度掌握不准，并且混有组织中可溶于乙醇的脂类及氨基酸等，影响脱水效果。

3.问题三:切片不完整，组织有缺损。

(1)出现原因:因包埋不正，修改不全所致。

(2)应对方法:包埋是组织切面固定在最佳位置，切削蜡块时要削出最大切面。

4.问题四:切片出现刀痕或裂隙。

(1)出现原因:磨刀质量不佳，研磨液内有杂质或刀刃有缺口所致。

(2)应对方法:尽量采用一次性刀片，保持刀锋锐利。

5.问题五:切片厚薄不均或出现波浪垅沟。

(1)出现原因:组织过硬或刀刃不锋利或刀架固定不牢。

(2)应对方法:组织处理过程要严格把关，特别是脱水透明，以防组织过硬，切片时先检查准

固定是否牢固。

6.问题六:切片转折重叠，散乱不整或混杂其他组织。

(1)出现原因:裱贴粗心，切片伸展不平，水温过高，过低所致。

(2)应对方法:严格控制捞片水温。

7.问题七:切片染色不均，部分区城失染。

(1)出现原因:切片脱蜡，脱苯不彻底所致。

(2)应对方法:注意脱蜡时间要保证，经常更换新液。

8.问题八:切片着色灰暗或核浆泛染。

(1)出现原因:染色质量不佳或染色时间过长、蓝化程度不足、洗涤不净、切片干燥所致。

(2)应对方法:控制好染色、分化、反蓝时间，充分水洗，保证脱水彻底。

9.其他注意事项:

(1)应选用对组织影响较小的透明剂，如三氯甲烷，香柏油等。三氯甲烷的作用缓和，组织在此液中时间稍长或过夜也不致于过脆，缺点是透明度不易掌握;香柏油对组织硬化作用极小，是处理细柔组织的最佳透明剂，组织在香柏油中数月也无妨害，皮肤，致密结缔组织经此液处理可较容易制片，缺点是透明时间长，价格贵。

(2)动物组织的浸蜡，包埋多选用熔点较低的石蜡，一般夏天应选用熔点56~58℃的石蜡，冬天选用54~56℃的石蜡。同时应注意熔蜡的温度，以高于石蜡熔点3~5℃为宜，熬新蜡只要加温到70-80℃即可，最好水浴熬制，切忌把蜡反复地熬到冒烟程度，这样碳化的蜡粒沉于蜡中，切片时碳粒被刀带出刀痕。