免疫荧光检测间接法的相关步骤

　　免疫荧光检测是我公司重点服务项目之一，相比传统的检测方法免疫荧光检查是将荧光素与抗体连接成荧光抗体,再与待检标本中的抗原反应，将反应物置荧光显微镜下观察抗原抗体复合物散发的荧光，借此对标本中的抗原进行鉴定和定位。免疫荧光检查可分直接法、间接法、夹心法和补体法。今天我们来介绍一下免疫荧光间接法的相关步骤：

如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第1抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第2抗体）与抗原标本反应，使之形成抗原—抗体—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第1抗体，其它步骤的抗原检查相同。

（1）免疫荧光检测首先滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于已知抗原标本片，10分钟后弃去，使标本片保持一定湿度。

（2）滴加以0.01mol/L，pH7.4的PBS适当稀释的待检抗体标本，覆盖已知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内，37℃保温30分钟。

（3）取出玻片，置于玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗1～2次，然后按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸5分钟，不时振荡。

（4）取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，滴加一滴一定稀释度的荧光标记的抗人球蛋白抗体。

（5）将玻片平放在有盖搪瓷盒内，37℃保温30分钟。

（6）重复操作步骤（3）。

（7）取出玻片，用滤纸吸去多余水分，滴加一滴缓冲甘油，再覆以盖玻片。

（8）荧光显微镜高倍视野下观察，结果判定同直接法。

以上就是免疫荧光间接法的相关实验步骤，如有其它疑问欢迎来电咨询我们。