马松染色实验步骤及注意事项

马松（Masson）染色是一种用于可视化组织中纤维和炎性因子的染色方法。该技术充分利用了不同组织成分对阴离子染料渗透性的差异。此法多用于观察病变组织中纤维结缔组织的增生和分布，纤维性肿瘤与肌源性肿瘤的鉴别，在肌肉疾病和心血管疾病的诊断中具有重要意义。

一、原理：

Masson染色，又称为马松染色，是结缔组织染色领域中经典且权威的一种技术方法，专注于胶原纤维的染色。该方法被广泛应用于组织学研究中，其主要目的是对胞核进行染色，并能够有选择地展示胶原纤维和肌纤维。Masson染色的原理与阴离子染料分子的大小以及对组织的渗透性密切相关：分子的大小由其分子量决定，小分子量的染料能够轻松穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则仅能进入结构疏松、渗透性较高的组织。然而，由于淡绿或苯胺蓝的分子量较大，因此Masson染色后，肌纤维呈现红色，而胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分这两者。

二、实验步骤：

1.石蜡切片脱蜡至水：将切片依次置于二甲苯Ⅰ中浸泡20分钟，二甲苯Ⅱ中浸泡20分钟，无水乙醇Ⅰ中浸泡10分钟，无水乙醇Ⅱ中浸泡10分钟，95%酒精中浸泡5分钟，90%酒精中浸泡5分钟，80%酒精中浸泡5分钟，70%酒精中浸泡5分钟，最后进行蒸馏水洗。

2.染细胞核：将切片浸入铁苏木素染液中染色1-2分钟，然后进行流水冲洗，分化，返蓝。

3.利用丽春红-酸性品红染色：将切片置于丽春红-酸性品红染液中进行染色5分钟，蒸馏水冲洗。

4.磷钼酸分化：将切片放入磷钼酸中进行分化数秒，然后进行水洗。

5.苯胺蓝染色：将切片放入苯胺蓝染液中进行染色5分钟，然后使用0.2%冰醋酸进行冲洗。

6.快速脱水和透明化：按照以下步骤进行脱水和透明化：依次将切片放入95%酒精Ⅰ中浸泡5分钟，95%酒精Ⅱ中浸泡5分钟，无水乙醇Ⅰ中浸泡5分钟，无水乙醇Ⅱ中浸泡5分钟，二甲苯Ⅰ中浸泡5分钟，二甲苯Ⅱ中浸泡5分钟，然后将切片从二甲苯中取出稍事晾干，最后使用中性树胶封片。

7.镜检，并进行图像采集和分析。

三、Masson染色实验注意事项

1、严格掌握染色步骤，特别是在每个步骤之间进行充分洗涤是至关重要的。这有助于防止前一步骤的染料残留对下一步染色产生影响。

2、组织的有效固定在染色过程中发挥着至关重要的作用。根据使用不同固定液的情况，可以灵活调整染色时间，以实现最佳染色效果。

3、使用0.2%冰醋酸水溶液进行洗涤，有助于产生清晰鲜艳的色调。

4、注意避免过度干燥：在染色过程结束后，务必防止样本的过度干燥，以避免产生伪影。

5、苯胺蓝和丽春红要充分溶解然后过滤使用，不过滤的染液里面杂质过多，会阻碍染液和组织的结合紧密程度。

6、磷钼酸水溶液对丽春红和酸性复红具有分化作用。在分化过程中，通过镜下仔细控制，可以观察到肌纤维和纤维素呈现红色，而胶原纤维呈淡粉红色即可。