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WB实验及注意事项

发布日期:2024/6/21 17:01:00来源:http://www.sxyksw.com/news1025080.html

详细介绍

一、配胶

注意事项

1、需留意配胶试剂的有效期和清澈度,一旦发现沉淀或结晶,要及时更换。

2、需注意pH8.8Tris-HCl和pH6.8Tris-HCl可能会产生沉淀,根据需要选择1.0M或1.5M的浓度。在低温下(4度以下)存放的10%SDS易结晶。30%丙烯酰胺需在避光的情况下存放在4度以下。APS具有活性,室温下容易失效,建议配制后分装并冷冻保存在-20度的冰箱中。TEMED有刺鼻的气味和挥发性,对神经有毒,使用时请在通风良好的环境下,并避免暴露在空气中。

3、插梳子时,可斜着插,以避免有气泡的产生。

4、注意防止胶条老化和干燥,注意电泳结束后,将胶条放置在实验台上晾干,以确保其干燥。若胶条老化、出现裂纹,可以在上面放置保鲜膜进行保护,这样不仅可以有效防止胶液泄漏,还可以延缓胶条老化。

5、胶最好现配现用,如果需要保存,最好用湿润的保鲜膜包好并置于4℃冰箱中。

二、电泳阶段

注意事项

1、确保上样体积一致,以免蛋白条带出现不同水平。空置的加样孔需添加相等体积的1×loading buffer,避免相邻通道蛋白样品扩散。在上样过程中,缓慢添加样品,避免快速吹打导致溢出,且上样体积应小于上样孔的总容积。

2、电泳液应在内槽填满,外槽填至1/4处。1.0mm厚的玻璃板最多可点样20μL,1.5mm厚的可点样40uL。

3、根据温度选择浓缩胶的电压,夏季室温较高时电压应较低,冬季相反。分离胶固定电压为150V高电压。调节电压时间可参考marker,若marker分开,表示蛋白已进入分离胶。夏季温度较高时,应将电泳槽放入冰水中降温,以防止凝胶变形。