抗原修复液的pH对免疫组化染色结果有什么影响?

目前所进行的常规石蜡切片标本均采用甲醛类固定剂固定，使位于细胞蛋白内或蛋白间的亚甲基桥形成桥联，进而引起许多抗原决定簇被封闭，所以在免疫组化染色时，需要进行抗原修复，以便暴露抗原，而得到满意的实验结果。

抗原修复是指通过加热或酶消化等方法，恢复组织样本中的抗原可识别性和免疫反应性。如果这一步骤没有做好，抗原可能仍处于失活状态，导致抗体无法与其特异性结合。抗原修复可以提高免疫组化试验中目标抗原的表达水平，并增强信号强度。如果修复步骤不足或未经适当优化，可能导致信号弱化，使得目标抗原难以检测或降低信号强度。某些抗原修复方法可能会对组织样本造成伤害或破坏。过度加热或消化时间过长可能导致组织结构的破坏，使得细胞和组织形态无法恢复。

抗原修复液的pH值的选择

1.首先我们知道没有一种抗原修复液能适合于所有的抗体，因为不同pH的抗原修复液其pH比化学成分对抗原修复起到作用更大，虽然多数抗体在抗原修复液全范围pH均能使抗原决定簇进行有效修复，但针对性选择不同pH的修复液，效果会更佳。常见抗原修复液作用如下：

1）柠檬酸钠缓冲液：扩张细胞膜及核膜的微细膜孔，增加膜的通透性

2）Tris-EDTA 缓冲液：消除甲醛溶液固定时产生的不利因素

2.抗原修复液的选择柠檬酸钠缓冲液适合大部分的抗原修复，如果目的抗原真的很难修复，可以选择 pH=8.0 或 9.0 的 EDTA 缓冲液。.有文献描述说pH的大小与抗原修复效果成正比，这是因为在加热或者液体中的碱性物质可以引起蛋白质分子之间的曼尼希反应，非常容易破坏蛋白质分子的交联。可专门用来针对那些有难度的细胞核抗原的修复，也就是说 EDTA 缓冲液的修复效果要优于柠檬酸盐缓冲液。